目的:对人血浆凝血因子Ⅷ( coagulation factor Ⅷ,FⅧ)制备过程中4种柱纯化前处理方法进行比较并分析其优缺点,为血源FⅧ的纯化制备提供借鉴与参考。方法冷沉淀经Tris溶解后的上清,分别用甘氨酸沉淀法、PEG沉淀法、酸沉淀法和氢氧化铝凝胶吸附法处理;用活化部分凝血活酶( APTT)法测定样品上清中FⅧ活性,计算总活性回收率和样品的比活性,用非还原性SDS-PAGE电泳比较去除杂蛋白的效果。结果4种处理方法中,甘氨酸沉淀法总活性回收率最高[(94.00±7.60)%],其次是酸性沉淀法[(89.47±2.60)%]、PEG沉淀法[(80.92±9.67)%],氢氧化铝吸附法的总活性回收率最低[(78.65±7.52)%];甘氨酸沉淀法与PEG沉淀法去除杂蛋白的效果优于酸性沉淀法和氢氧化铝吸附法;经4种不同方法处理后,甘氨酸沉淀法所得样品中 FⅧ比活最高[(0.6856±0.1258)IU/mg],其次是PEG沉淀法[(0.5773±0.0787)IU/mg]、酸性沉淀法[(0.3885±0.0301)IU/mg],氢氧化铝吸附法所得样品比活最低[(0.2879±0.0472)IU/mg]。结论在上述方法中,甘氨酸沉淀法和PEG沉淀法的总体效果较佳,且因后者操作更加简便、快捷,在实际生产过程中采用PEG沉淀法较为合适。
作者:王方;吕茂民;赵雄;余蓉;章金刚
来源:军事医学 2015 年 3期