目的 探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)诱导L929-A细胞发生受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein 1,RIP1)依赖性凋亡的分子机制.方法 通过胰蛋白酶浓度梯度消化及蛋白质印迹法检测RIP1、胱天蛋白酶8(caspase-8)和Bid蛋白的表达和线粒体定位;利用荧光探针标记法检测TNF-α处理后L929-A细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、胞内钙离子浓度、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)浓度,应用试剂盒检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ的活性变化;采用RIP1激酶特异性抑制剂坏死抑素1(necrostatin-1,Nec-1)和Bid基因敲除的L929-A细胞评估RIP1激酶活性和Bid蛋白在介导细胞死亡中的作用.结果 RIP1、caspase-8和Bid蛋白均定位在线粒体外膜上;TNF-α处理后3 h即可诱导Bid剪切,伴随Bid剪切,线粒体呼吸链复合体功能检测显示复合体Ⅲ的活性受到抑制,MMP下降.TNF-α处理后6~12 h细胞内ROS升高、钙离子浓度上升、ATP浓度降低;抑制RIP1激酶活性或敲低Bid蛋白可完全拮抗TNF-α诱导的细胞毒性.结论 TNF-α通过诱导RIP1激酶活性依赖的Bid剪切,继而抑制线粒体呼吸链和细胞能量代谢,诱导细胞死亡.

作者：王书乐；成祥；陈国柱；赵名；于晓妉

来源：军事医学 2017 年 41卷 5期