目的 为获得一定数量高纯度的自然杀伤细胞(natural killer cells,NK),拟采用水动力高压转染技术实现Flt-3配体(Flt-3 ligand,FL)基因在小鼠肝的高效表达,以刺激脾NK细胞体内扩增,随后通过优化免疫微磁珠分选(MACS)技术获取大量、高纯度NK细胞,为细胞治疗提供支撑.方法 C57BL/6小鼠经多次水动力高压转染FL表达质粒后,流式细胞术检测脾NK细胞的扩增程度及表型变化,并通过MACS技术分离纯化NK细胞.结果 与一次水动力高压转染FL目的质粒的结果相比,两次水动力转染后小鼠脾明显增大,淋巴细胞绝对数量增加(6.02±1.15)倍,NK细胞亚群比例增加(2.07±0.39)倍,NK细胞亚群绝对数量增加(12.49±2.39)倍.同时,FL刺激对NK细胞活性及表型无明显影响.最后,经偶联CD5(Ly-1)磁珠阳选和去除T、B等多种杂细胞磁珠阴选相结合的双重分选方法,可获得纯度为(83.81±0.92)％的NK细胞,较单独阴选纯度提高(1.60±0.02)倍.结论 经两次FL表达质粒水动力高压转染,可在不影响NK细胞活性及表型的前提下,实现其在小鼠脾的大量扩增.阳选和阴选相结合的双重MACS分选技术能有效去除T、B等杂细胞影响,获取高纯度NK细胞,为肿瘤细胞免疫治疗奠定基础.
作者：安洁；王蕾；吴涛；张玉龙；周欠欠；付秋霞；詹林盛
来源：军事医学 2017 年 41卷 10期
