目的 构建带FLAG标签的人癌基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase1,PGK1)的真核表达载体,并验证其表达产物的生物学功能.方法 采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人PGK1基因,并将其克隆到真核载体pcDNA3.0-FLAG上,酶切鉴定和测序鉴定后,通过Western印迹检测其表达;将FLAG-PGK1载体转染乳腺癌细胞ZR75-1,利用乳酸试剂盒测定乳腺癌细胞外乳酸含量,并通过CCK8法和划痕实验测定乳腺癌细胞的生长和迁移.结果 从乳腺文库中,PCR扩增出约1260 bp DNA片段,克隆到pcDNA3.0-FLAG载体上,测序结果与目的序列一致.Western印迹检测到目的基因表达,且位置正确.乳酸含量测定结果显示,PGK1可促进细胞乳酸含量增加;细胞生长曲线结果显示,转染FLAG-PGK1的乳腺癌细胞生长较空载体生长快;细胞划痕实验表明PGK1促进细胞迁移.结论 成功构建了FLAG-PGK1的真核表达载体,其表达促进了乳腺癌细胞生长和迁移,同时也促进了乳酸的增加,为进一步研究PGK1在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.
作者：王圣尧；罗沙柳；叶棋浓；刘婕
来源：军事医学 2018 年 42卷 7期
