目的 构建带有His标签的人乳酸脱氢酶A(LDHA)基因原核表达载体,并进行蛋白纯化,为研究LDHA蛋白功能奠定基础.方法 以人乳腺文库作为模板,通过PCR技术扩增得到LDHA基因的编码序列,插入到pET-28a(+)载体中并测序.LDHA在大肠杆菌中进行诱导表达并纯化蛋白,SDS-PAGE及Western印迹检测蛋白纯化效果.采用His pull-down技术检测纯化蛋白与沉默信息调节因子2(SIRT2)的相互作用.结果 PCR扩增获得长度约1000 bp的LDHA编码序列,并插入到pET-28a(+)载体中,序列测定结果显示重组质粒构建成功.SDS-PAGE及Western印迹结果显示获得带有His标签的LDHA蛋白.His pull-down实验证明His-LDHA能与SIRT2体外结合,证实其生物学活性良好.结论 成功构建带His标签的LDHA基因原核表达载体,并得到纯化蛋白,为进一步研究LDHA蛋白的功能奠定了基础.
作者：葛祥伟；陈静漪；石烟祝；蒋琦炜；米月；谢天；叶棋浓；汪进良
来源：军事医学 2021 年 45卷 10期
