目的建立逆转录病毒介导的反义多药耐药MDR1基因转移体系,探讨反义RNA封闭白血病耐药细胞中MDR1基因表达的能力.方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从白血病耐药细胞株HL-60/VCR mRNA中扩增出含有启始密码子ATG的524bp的MDR1基因cDNA片段,反向插入逆转录病毒载体pLXSN,通过脂质体转和乒乓感染单、双噬型包装细胞GP+E86和GP+envAM12,以双嗜型病毒上清感染白血病耐药细胞K562/MDR,半定量RT-PCR和流式细胞术(FCM)分析MDR1基因转录和P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果酶切、PCR和DNA测序证实反义MDR1基因重组逆转录病毒载体pLASSN构建正确;双嗜型病毒生产细胞的滴度为1.3×105CFU/ml,巢式PCR和补救分析均未检测到辅助病毒存在;PCR和RT-PCR分析证实病毒生产细胞和反义修饰的耐药细胞K562MDR/LASSN中均有反义MDR1基因整合和MDR1基因反义RNA的转录;FCM分析K562MDR/LASSN细胞中P-gp表达强度和表达率比对照细胞均有明显下降.结论逆转录病毒介导的反义基因转移系统安全有效,可用于肿瘤耐药逆转的研究.
作者：王玮；傅建新；陈子兴；岑建农；李建勇；薛永权
来源：江苏医药 2002 年 28卷 10期
