目的：克隆表达粉尘螨过敏原 Der f 13，并鉴定其免疫原性。方法提取粉尘螨总 RNA，通过 RT-PCR 获得 Der f 13的 cDNA 片段。根据已知 Der f 13序列设计出表达引物，再通过已获得的 cDNA 和引物进行 PCR 扩增，将扩增产物连接到 T 载体上并转入克隆菌 Top 10中，涂板、培养，挑选阳性菌落，LB／AMP 培养送测序。将测序正确的基因转入表达载体 PET32中，经酶切鉴定测序再转入表达菌 BL21中，表达 Derf 13蛋白，纯化、鉴定所得蛋白，并通过 Western-blot 等方法检测其免疫学活性。结果RT-PCR 结果显示，Der f 13基因片段大小为410 bp；同源性分析表明：本实验所克隆的 Der f 13基因与 NCBI 数据库的 Der f 13基因的同源性为95％；SDS-PAGE 结果显示，重组质粒 PET32-Der f 13在 BL21（DE3）中高效表达，重组蛋白分子质量为35 ku，表达后的重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在，经与尘螨过敏患者血清反应，检测出重组蛋白有较强免疫学活性。结论克隆出 Der f 13基因，表达和纯化出目的蛋白，并具有免疫原性，为过敏性疾病的诊断和免疫治疗奠定理论基础。
作者：王媛媛；林建立；黄娜娜；巴金戈；刘志刚；刘晓宇
来源：南昌大学学报（医学版） 2016 年 1期
