目的：构建含乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）增强子Ⅱ（enhancerⅡ，EnhⅡ）、核心启动子区（basal core promoter，BCP）和 C 区基因的真核表达载体，以研究 EnhⅡ、BCP 和 C 区基因的生物功能。方法提取 HBV DNA，PCR 法扩增 EnhⅡ-BCP-C 区基因片段；HindⅢ和 XbaⅠ双酶切 PCR 产物，胶回收纯化的 DNA 片段，连接入载体 pBudCE4．1，酶切及 DNA 测序鉴定重组载体。采用脂质体介导的方法将重组载体 DNA 转染 HepG2细胞和HeLa 细胞，酶联免疫吸附试验检测重组载体转染的 HepG2细胞、HeLa 细胞上清液及细胞裂解物中乙型肝炎 e 抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）的表达水平。结果双酶切及 DNA 测序鉴定，含840 bp HBV EnhⅡ-BCP-C 区基因片段的重组载体构建成功。EnhⅡ＋BCP＋C／pBudCE4．1重组载体转染 HepG2细胞24、48 h 后的上清液和转染48 h 后裂解物中 HBeAg 表达水平均明显高于 pBudCE4．1空载体转染 HepG2细胞（均 P＜0．05），EnhⅡ＋BCP＋C／pBudCE4．1重组载体转染 HeLa 细胞24、48 h 后的上清液和转染48 h 后的裂解物中 HBeAg 表达水平与pBudCE4．1空载体转染 HeLa 细胞比较差异均无统计学意义（均P＞0．05）。结论成功构建 HBV EnhⅡ-BCP 启动-C 基因肝细胞特异表达的真核载体，

作者：夏方娜；邹淑慧；周艳；刘金辉

来源：南昌大学学报（医学版） 2016 年 1期