目的：使用 RNA 干扰技术阻断人卵巢癌 HO-8910细胞中 Cyclin E 的表达，分析 Cyclin E 表达受抑制后产生的一些效应，采用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质，探讨 Cyclin E 在人卵巢癌细胞增殖中的作用，以期为人卵巢癌发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法构建质粒表达载体pU6-Cyclin E-siRNA，同时设立阴性对照组和空白对照组。采用脂质体转染法稳定转染卵巢癌 HO-8910细 胞， G418筛选阳性克隆细胞；噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长曲线的改变；RT-PCR 法比较转染前后 Cyclin E mRNA的表达量的变化；双向凝胶电泳-图像分析-质谱技术-数据库搜索，比较转染前后蛋白质组表达的变化，鉴定差异显著的蛋白点。结果1）成功构建了 Cyclin E 干扰 RNA 的重组质粒并获得稳定转染组细胞 HO-8910-Cyclin E siR-NA。2）稳定转染组 HO-8910-Cyclin E siRNA 细胞与阴性对照组 HO-8910-neo 细胞和空白对照组相比，细胞生长速度减慢，Cyclin E mRNA 表达水平降低。3）通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到稳定转染组低表达蛋白5个，经数据库搜索分别是锌指蛋白 ZFP-36、波形蛋白、肿瘤拒绝抗原 gp96、未知蛋白、DNA 校正蛋白酶Ⅱ。结论Cyclin E 干扰RNA 干扰后卵巢癌 HO-8910细胞
作者：刘瑞平；赵鹏伟；白瑞霞
来源：南昌大学学报（医学版） 2016 年 1期
