目的:构建携带核受体相关因子-1(nuclear receptor related factor 1,nurr1)基因的慢病毒表达载体,并测定其对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的感染效率。方法使用PCR 技术克隆目的 nurr1基因,将 nurr1基因重组到慢病毒表达载体,筛选阳性克隆,将携带 nurr1基因的质粒用脂质体介导法转染入293T 细胞,获得携带 nurr1基因的重组慢病毒,再用重组慢病毒感染 hUCMSCs,通过荧光显微镜及流式细胞术检测其感染效率。结果成功构建了携带 nurr1基因的重组慢病毒载体,并获得病毒滴度为2×108 TU·mL-1的慢病毒浓缩液。成功转染重组慢病毒的 hUCMSCs 可表达绿色荧光蛋白,当病毒感染复数(mul-tiple of infection,MOI)值为60时转染效率最高为90.8%。结论携带 nurr1基因的慢病毒载体成功构建并成功转染入 hUCMSCs,当 MOI 值为60时转染效率最高。
作者:胡棠生;简雯;蔡婵;涂怀军
来源:南昌大学学报(医学版) 2016 年 56卷 2期