目的建立能够稳定表达人G250基因的renca细胞株。方法采用PCR扩增出人G250基因编码区长度的互补序列，根据DNA重组技术定向插入到pIRES-neo真核表达载体中，得到重组表达质粒pIRES-neo-G250。用阳离子脂质体介导法将该质粒稳定转染到renca小鼠细胞中，通过调整G418的浓度筛选出阳性的克隆，蛋白免疫印迹和免疫荧光测试验证人G250基因转染小鼠renca细胞株后的表达情况。结果经过限制性内切酶鉴定和序列分析发现pIRES-neo-G250重组质粒构建正确，蛋白免疫印迹结果表明，可以从稳定转染pIRES-neo-G250的小鼠renca细胞中检测到G250的蛋白条带，流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果表明，稳定转染pIRES-neo-G250的renca细胞用人的G250特异性抗体检测到有高效的荧光表达。结论成功建立了稳定、高效表达pIRES-neo-G250分子的人G250基因renca细胞株，为后续的肾癌疫苗研究奠定了基础。
作者：李云奇；肖毅；董金凯；王伟；田仁礼；殷小涛；林晓亮；于继云；高江平
来源：军医进修学院学报 2013 年 5期
