目的：构建胱抑素C(cystatin C，Cys-C)原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法根据GeneBank报道的Cys-C基因序列，采用RT-PCR技术从人胚肾细胞系HEK293中获得Cys-C的cDNA序列，经PCR、酶切及测序确认最终获得重组载体pET-30a(+)-CysC，转化大肠埃希菌Rosetta，通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalac-topyranoside，IPTG)诱导表达、经镍柱亲和层析法纯化获得Cys-C融合蛋白。结果序列分析表明，人Cys-C基因成熟肽编码区编码122个氨基酸；与GeneBank(NM-000099.2)中已报道的序列有100
作者：唐红卫；刘一凡；孙禅；端永艳；李迪；李绵洋；王成彬
来源：解放军医学院学报 2013 年 10期
