目的：优化艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件，在获得高表达融合蛋白后对其进行纯化，为艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3单克隆抗体的制备奠定基础。方法以诱导前菌液600 nm处的光密度值（OD600）、诱导温度、诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷（IPTG）浓度和诱导时间为单变量，分别诱导融合蛋白的表达，在此基础上采用正交试验对融合蛋白的诱导表达条件进行优化，通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳半定量分析融合蛋白的表达量及表达形式，以Western blot对融合蛋白进行鉴定，以GST 亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果融合蛋白诱导表达的最佳条件为诱导前菌液OD6000．8、IPTG浓度0．6 mmol/L、诱导时间12 h、诱导温度30℃，融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主，经纯化后，融合蛋白纯度超过90％。结论本研究成功优化了艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白的诱导表达条件，获得大量表达，并成功对其进行了纯化，为后续单克隆抗体的制备奠定了基础。
作者：陈伟；刘文恩；李艳华；简子娟；罗姗；钟一鸣
来源：检验医学与临床 2014 年 6期
