目的：构建稳定干扰真核起始因子4E（eIF4E）基因的鼻咽癌 CNE2细胞系。方法设计针对 eIF4E基因 mRNA 序列的 RNA 干扰序列，以慢病毒载体 pGC‐LV 为基础构建感染体系。慢病毒感染 CNE2细胞后，经嘌呤霉素压力筛选稳定敲减 eIF4E 基因的 CNE2细胞株。采用定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测 eIF4E mRNA和蛋白的表达水平；采用细胞增殖和迁徙实验验证 eIF4E 敲减对 CNE2细胞的影响。结果成功构建并筛选获得带有 eIF4E 特异性短发夹 RNA 的慢病毒颗粒；将慢病毒颗粒转入 CNE2细胞，经抗菌药物压力筛选获得稳定敲减eIF4E 基因的 CNE2细胞（CNE2siEp）及阴性对照细胞（CNE2siNC）。与 CNE2siNC 细胞相比，CNE2siEp 细胞eIF4E mRNA 表达水平下调76．0％，蛋白表达水平下调50．0％，细胞增殖活性下调85．0％，运动活性下调59．0％。结论成功构建稳定敲减 eIF4E 的 CNE2细胞系，其 eIF4E 基因表达水平与功能明显受抑。
作者：赵毅；王燕；胡新荣
来源：检验医学与临床 2015 年 7期
