目的 建立一种基于通用多重不对称聚合酶链反应(PCR)联合基因芯片的下呼吸道病原菌及耐药基因检测方法,同步实现6种下呼吸道常见病原菌(大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌)和两种碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaVIM)快速检测.方法 针对待检病原菌及耐药基因的保守序列设计特异性引物与探针,并制备相应的基因芯片.优化多重PCR的反应体系和杂交参数,分析其特异度、灵敏度,并通过临床标本进行方法应用评价.结果 本研究建立的检测方法特异性强、稳定性好,能在4 h内特异性地鉴别单一或多重靶标.检测大肠埃希菌纯培养物的灵敏度为104copy/mL,鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌及碳青霉烯酶基因(blaKPC、bla VIM)的灵敏度均为1 03 copy/mL,金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌的灵敏度均为102 copy/mL.与产酸克雷伯菌、黏质沙雷菌、奇异变形杆菌、表皮葡萄球菌、唾液链球菌、流感嗜血杆菌等6种病原菌无交叉反应.结论 基于通用多重不对称PCR结合基因芯片的下呼吸道病原菌及耐药基因检测方法特异性强、灵敏度高,为快速、灵敏地鉴定下呼吸道病原菌及耐药基因提供了 一种有效的检测手段.
作者：刘俊杰；谢海宇；张艳妮；陈桂柳；何小维；王羽
来源：检验医学与临床 2023 年 20卷 14期
