本研究介绍一种多目的片段一步重组克隆的载体构建的新方法.该方法要求在 PCR 引物设计时,在第一个目的片段上游引物的5'端和最后一个目的片段下游引物的5'端各设置16 bp 与线性化目标载体末端同源的序列,再在各目的片段之间的引物上各设计25 bp 的重叠序列,以便进行融合 PCR 将多片段扩增成融合片段.此方法将融合片段与线性化骨架载体进行一步重组、转化和重组子鉴定.该方法只要求骨架载体上有一个特异性酶切位点,特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;该方法还可以引入定点突变,可便捷构建分析启动子功能等需引入定点突变的载体;该构建方法还可以实现多基因的无缝融合构建多顺反子,在构建原核基因表达载体、叶绿体表达载体、线粒体表达载体方面有着明显优势.本研究以水稻胚乳特异性表达载体 PGt1-mGFP-pSB130为例,介绍此载体构建方法.
作者：邝翡婷；袁定阳；李莉；李新奇
来源：基因组学与应用生物学 2012 年 6期
