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目的 探讨多药耐药相关蛋白4 (MRP4)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)通透性及细胞骨架的影响.方法 PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组,对照组(细胞不做任何处理)、LPS组(细胞仅接受LPS刺激)、shMRP4重组腺病毒组(Ad-shMRP4,将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上,通过腺病毒感染细胞+LPS刺激)、shRNA重组腺病毒组(Ad-shRNA,带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞+ LPS刺激).通过荧光显微镜观察细胞感染率,Western botting检测MRP4的表达水平,Transwell小室法检测单层细胞通透性,激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况.多组间差异采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 与对照组比较,LPS组及Ad-shRNA组MRP4的表达水平显著上调(P<0.05)、单层细胞通透性显著增加(2、6、12、24h分别为:0.28±0.02和0.41±0.04、0.32±0.02;0.30±0.01和0.53±0.04、0.39±0.03;0.33±0.04和1.12±0.17、0.70±0.07;0.32±0.03和0.79±0.02、0.57±0.05,P<0.05),F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成.与LPS组比较,Ad-shMRP4组MRP4的表达水平明显下调(P<0.05)、单层细胞通透性明显降低(2、6、12、24 h分

作者:夏文芳;郑颜磊;周青山;苏镔;张桓铭

来源:中华急诊医学杂志 2017 年 26卷 9期

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作者:
夏文芳;郑颜磊;周青山;苏镔;张桓铭
来源:
中华急诊医学杂志 2017 年 26卷 9期
标签:
脓毒症 多药耐药相关蛋白4 内皮通透性 细胞骨架 基因沉默 Sepsis Multidrug resistance-associated protein 4 Endothelial permeability Cytoskeleton Gene silencing
目的 探讨多药耐药相关蛋白4 (MRP4)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)通透性及细胞骨架的影响.方法 PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组,对照组(细胞不做任何处理)、LPS组(细胞仅接受LPS刺激)、shMRP4重组腺病毒组(Ad-shMRP4,将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上,通过腺病毒感染细胞+LPS刺激)、shRNA重组腺病毒组(Ad-shRNA,带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞+ LPS刺激).通过荧光显微镜观察细胞感染率,Western botting检测MRP4的表达水平,Transwell小室法检测单层细胞通透性,激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况.多组间差异采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 与对照组比较,LPS组及Ad-shRNA组MRP4的表达水平显著上调(P<0.05)、单层细胞通透性显著增加(2、6、12、24h分别为:0.28±0.02和0.41±0.04、0.32±0.02;0.30±0.01和0.53±0.04、0.39±0.03;0.33±0.04和1.12±0.17、0.70±0.07;0.32±0.03和0.79±0.02、0.57±0.05,P<0.05),F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成.与LPS组比较,Ad-shMRP4组MRP4的表达水平明显下调(P<0.05)、单层细胞通透性明显降低(2、6、12、24 h分