目的 建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠.方法 采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A.该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠.首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代.选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群.结果 酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功.经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠.BLI结果 显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达.结论 建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础.
作者：孙梦宁；兰海云；马玉；赵亚；吕欣；杨敬；雷迎峰；姚敏；康健；招明高；汪爱勤；尹文
来源：临床肝胆病杂志 2011 年 27卷 1期
