目的 观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC - T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响.方法 Smad3 shRNA慢病毒感染HSC - T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real - time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用；将HSC-T6对照、HSC - T6+ TGFβ1( 10 ng/ml)、Smad3 shRNA以及Smad3 shRNA+TGFβ1( 10 ng/ml)这4组细胞进行如下检测:(1)MTT检测细胞增殖；(2)流式细胞仪检测TGFβ1作用24、36 h细胞周期分布；(3)Real -time PCR检测24、36 h时细胞周期、增殖及肝纤维化相关基因mRNA的表达变化；(4)ELISA检测24、36 h培养液上清中胶原蛋白(COL)Ⅰ、COLⅢ及α- SMA的含量.结果 Smad3 shRNA慢病毒感染HSC - T6细胞至96h,感染率为71.3％,对Smad3 mRNA的表达抑制率为50％.(1) MTT结果显示,TGFβ1促进HSC - T6增殖；与相应未感染Smad3shRNA病毒组相比,Smad3 shRNA组以及Smad3 shRNA +TGFβ1组细胞增殖能力均下降.(2)细胞周期检测发现,24、36 h时,Smad3 shRNA+ TGFβ1组与Smad3 shRNA组相比,细胞周期分布差异无统计学意义(P＞0.05)；(3) Real - time PCR显示,Smad3 shRNA+ TGFβ1组较HSC - T6+ TGFβ1组,Smad3、原癌基因(c- myc)、细胞周期依赖性激酶-2(CDK-2)、细胞周期素E(cyclin E)、表皮生长因子(EGF)、核因

作者：郑素军；邢欣悦；武聚山；王世美；张莹；韩源平；俞豪；陈煜；刘梅；段钟平

来源：临床肝胆病杂志 2012 年 28卷 4期