目的 研究氧化应激状态下维生素C作为抗氧化剂对视网膜色素上皮细胞的保护作用以及维生素C和SIRT1之间的调节机制.方法 以人视网膜色素上皮细胞-19(ARPE-19)细胞为研究对象,分为空白对照组,无维生素C组(0 μmol),低浓度维生素C组(20 μmol),中等浓度维生素C组(100 μmol)和高浓度维生素C组(500 μmol).培养过程中添加不同浓度维生素C之后对细胞加以H2 O2(100 μmol)处理12 h或24h建立氧化应激模型.利用MTT法检测ARPE-19细胞存活率,膜联蛋白V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡以及活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内活性氧的改变.使用SIRT1靶向siRNA进行SIRT1敲除,细胞使用预定浓度的维生素C进行孵育,并分为空白对照组,阴性对照组,siRNA干扰组.先用10 mM SIRT1激动剂白藜芦醇(RSV)和5 mM SIRT1抑制剂烟酰胺(NA)对细胞进行孵育,然后加入H2O2(100 μmol)处理12 h或24h,RT-PCR及Western blot方法检测SIRT1、p53和Foxo3基因表达水平.结果 经过H2O212 h处理后,较高浓度的维生素C(500μmol)与较低浓度(20 μmol)的维生素C无明显保护作用,而中等浓度的维生素C(100 μmol)能够显著提高细胞的生存能力(P＜0.05),减少ARPE-19细胞的凋亡数量(P＜0.05),降低细胞内ROS水平(P＜0.05),差异有统计学意义.维生素C的作用可上调H2O2

作者：伟伟；杨佳

来源：临床和实验医学杂志 2016 年 15卷 18期