目的 构建干扰DNMT1基因的慢病毒并感染结肠癌SW620细胞株,观察其对细胞生物学行为的影响.方法 合成DNMT1shRNA寡核苷酸链,与pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP连接构建重组慢病毒质粒,转染HEK293T细胞进行病毒包装.包装后的病毒感染SW620细胞,分为3组:Lentivirus-DNMT1组(LV-DNMT1)、Lenti-virus-vector组(LV-vector)、空白对照组(Blank).采用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(West-ern Blot)检测细胞DNMT1及T-cadherin表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移.结果 成功构建了靶向干扰DNMT1的慢病毒载体.与LV-vector组和Blank组比较,LV-DN-MT1组DNMT1 mRNA(0.49±0.09)和蛋白(0.39±0.11)表达显著下调(P＜0.05),而T-cadherin mRNA(0.74±0.12)和蛋白(0.69±0.13)表达显著上调(P＜0.05).与LV-vector组和Blank组比较,LV-DNMT1组第12 h、24h、36 h、48 h、72 h时的OD(570)值降低(P＜0.05),细胞总凋亡率(26.06％)增加(P＜0.05),穿膜细胞数目[(21.33±8.02)个]和细胞迁移距离[(303.27±47.58) μm]减少(P＜0.05).结论 DNMT1慢病毒载体可有效敲减DNMT1表达和上调T-cadherin表达,抑制SW620细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭、迁移能力.

作者：董峰；马君俊；何子锐；张鲁阳；洪希周

来源：临床和实验医学杂志 2016 年 15卷 23期