目的 观察多肽Apelin基因缺失对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响,探讨在梗阻性肾病肾纤维化形成中Apelin的作用和可能机制.方法 利用CRISPR/Cas9技术构建Apelin基因敲除小鼠(KO)共20只,同时选取野生型小鼠(WT)20只,均为8周龄雄性C57BL/6J种系,采用随机数字表法分为:KO+Sham组、KO+UUO组、WT+Sham组、WT+UUO组,每组各10只.分别对小鼠行单侧输尿管结扎(UUO)或假手术(Sham).术后2周将小鼠处死,取血浆和手术侧肾脏进行检测.采用Masson染色观察肾脏纤维化程度,免疫组织化学染色检测肾脏基质成分纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-I)的分布和表达情况.采用Western blotting法检测肾小管上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),以及致纤维化细胞因子--转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体TGFβ-R1的蛋白表达量.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血浆肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平.结果 KO+UUO组小鼠肾脏可见明显的肾小管萎缩和肾间质纤维化,基质成分FN和Col-I表达量显著升高.WT+UUO组小鼠肾脏的纤维化程度和基质的表达量均低于KO+UUO组,差异具有统计学意义(P ＜0.05).KO+Sham组和WT+Sham组肾脏无明显的纤维化改变和基质的沉积.KO+UUO组小鼠,可见显著的肾小管上皮-间充质
作者：王丽妍；刘文虎；关毅鸣；刁宗礼
来源：临床和实验医学杂志 2020 年 19卷 4期
