目的 探讨临床分离的因外膜蛋白突变导致的铜绿假单胞菌(Pa)碳青霉烯类耐药机制是否与药物诱导相关.方法 在M-H平板上用亚胺培南(IPM)和美罗培南(MEM)药敏纸片分别诱导3株Pa(Pa标、Pa1和Pa2).琼脂稀释法测定诱导前后Pa对IPM、MEM、头孢他啶和头孢吡肟4种药物的最低抑菌浓度(MIC).改良三维试验检测诱导后产碳青霉烯酶变化.SDS-PAGE观察Pa外膜蛋白OprD的改变.PCR扩增oprD基因并进行序列分析.实时荧光定量PCR检测Pa外排系统表达情况.并对诱导耐药菌株进行稳定性分析.结果 诱导第5天出现对IPM和MEM耐药(MIC≥8 μg/mL),且MEM诱导株对2种药物敏感性降低速度明显快于IPM诱导株.诱导株未检出耐药酶,外膜蛋白OprD出现缺失或者减少.oprD基因测序发现Pa标(I)、Pa标(M)和Pa1 (M)分别在831(TGG→TGA)、1017 (TGG→TGA)和1014(TGG→TAG)有碱基突变产生终止密码子,Pa2(I)在1 206处有新的碱基插入导致移码突变.外排基因以MexA过度表达为主,同时伴有其他外排系统的过度表达.稳定性分析发现5株诱导株的耐药表型稳定,另1株外排系统表达量呈现持续升高,导致MIC值的右移.结论 在碳青霉烯类药物环境中,外膜蛋白OprD表达减少和基因的突变以及外排系统的过度表达是引起诱导株对IPM和MEM耐药的主要原因.此型耐药株不仅耐药表型稳
作者：曾章锐；王卫萍；王莹；邵海枫
来源：临床检验杂志 2013 年 31卷 6期
