目的 建立检测人胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、IGF-1受体(IGF-1R)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)及IGF-2受体(IGF-2 R)基因的实时荧光定量PCR.方法 设计并合成检测上述4种基因的引物及TaqMan探针;提取胎盘组织RNA并逆转录为cDNA,分别将扩增的4种基因片段纯化后与质粒载体连接,克隆构建含目的基因片段的重组质粒,分别作为定量检测上述4种基因的标准品;用建立的实时荧光定量PCR检测上述4种基因,并用测序验证.结果 PCR扩增产物经测序分析证实分别为上述4种基因的特异性片段;定量检测IGF-1、IGF-1R、IGF-2及IGF-2R的线性范围分别为1.00×102～1.00×108 copies/μL、2.00×102 ～2.00×108 copies/μL、3.00×102 ～3.00×108 copies/μL及5.00×102 ～5.00×108 copies/μL;相关系数(r)分别为0.994、0.993、0.995及0.996;扩增效率分别为92.35％、96.06％、94.92％及98.84％;批间变异系数(CV)分别为1.64％～2.83％、1.73％～1.98％、2.47％～4.09％及2.25％ ～ 2.52％;批内CV分别为1.36％、1.02％、1.04％及0.96％.结论 建立了高度敏感、特异检测人IGF及其受体的实时荧光定量PCR法.
作者：彭启松；张俊；罗光华
来源：临床检验杂志 2014 年 32卷 5期
