目的 对超速离心法、超滤法和沉淀法3种分离尿液中外体(exosome)方法进行比较,为临床研究选择合适的分离方法提供依据.方法 用超速离心法、超滤法和沉淀法3种方法分别从4例健康人和2例慢性肾脏病(CKD)患者尿液中分离exosome.用透射电镜观察尿exosome形态结构,BCA法检测exosome总蛋白质浓度,分别在尿体积及exosome总蛋白质浓度相同上样条件下,用western blot(WB)检测exosome标志蛋白TSG101和Alix.结果 3种分离方法均能获得直径为40 ～ 100 nm的圆形膜性囊泡;WB能检测到超速离心法及超滤法分离得到的exosome标志蛋白,而沉淀法未检测到;超滤法尿exosome总蛋白质浓度远高于超速离心法及沉淀法;超速离心法尿体积及exosome总蛋白质浓度相同情况下上样时所有样本均能检测到exosome标志蛋白,且表达量在3种方法中均最多;超滤法尿体积相同情况下上样,4例健康人均能检测到exosome标志蛋白,而以exosome总蛋白质浓度相同上样时,仅有2例健康人能检测到标志蛋白,但2例CKD患者在此两种上样方式未检测到标志蛋白;沉淀法两种上样条件下所有样本均未检测到exosome标志蛋白.结论 超速离心法分离尿exosome效果较好,开展尿exosome临床研究时建议选择超速离心法.
作者：朱迎星；郑萍；赵绍林；杨晋；吴惠毅
来源：临床检验杂志 2016 年 34卷 1期
