目的 建立一种快速检测流感病毒A型(FluA)及高致病性禽流感(HPAI) H5N6病毒感染的荧光定量RT-PCR法.方法 以人细胞核糖核酸酶P(RP)基因作为临床样本的内参基因,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针,建立一种检测FluA及HPAI-H5N6病毒的一步法多重荧光定量RT-PCR方法,评估其灵敏度、特异性,并与上海之江公司提供的试剂及测序法进行比较.结果 建立的多重荧光定量RT-PCR法检测Flu A、H5、N6及RP质粒标准品的灵敏度均达102copies/mL.各对引物和相应探针仅检测出相应的病毒,在这些病毒和常见病原分析中未发现存在交叉反应,特异性达100％.用该法检测135例临床标本,结果显示FluA为23例,未发现HPAI-H5N6病毒的感染者;与上海之江公司提供的试剂的检测结果及基因测序结果一致.结论 建立的一步法多重荧光定量RT-PCR法可用于FluA及HPAI-H5N6病毒感染患者的早期诊断.
作者：马光华；崔大伟；谢国良；杨先知；高敏；车飞虎；孙海燕；陈瑜
来源：临床检验杂志 2016 年 34卷 2期
