目的 探讨miR-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 RT-PCR法检测miR-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证miR-200b-3p和DNMT3A之间的靶向关系;构建过表达的miR-200b-3p和DNMT3A真核细胞载体;qRT-PCR和western bolt检测MMPs和COLⅡmRNA及蛋白质在稳定转染的软骨细胞中的表达;通过细胞活力测定(MTS法)、团块培养、Hoechst 33342染色法评估细胞的增殖与凋亡情况.结果 qRT-PCR法及westernbolt结果显示,miR-200b-3p和COLⅡ在骨关节炎软骨组织中呈低表达,而DNMT3A和MMPs呈高表达;双荧光素酶和western bolt证实miR-200b-3p和DNMT3A之间存在靶向关系;MTS法、团块培养及Hoechst 33342染色法结果证实,在miR-200b-3p过表达的软骨细胞中,DNMT3A和MMPs的表达水平明显下调,COLⅡ的表达水平则明显上调,且细胞的生存能力增强,凋亡率降低(P均<0.05);在过表达DNMT3A的软骨细胞中,MMPs的表达水平明显上调,COLⅡ的表达水平明显下调,且细胞的生存能力减弱,凋亡率增加(P均<0.05).结论 miR-200b-3p可以抑制MMPs分泌和促进COLⅡ合成,并且可以通过抑制DNMT3A的表达来增强骨关节炎软骨细胞的生长与增殖.

作者：商安全；王微微；陆文英；胡丽庆；李冬

来源：临床检验杂志 2018 年 36卷 8期