构建以Ag85B基因为基础的DNA疫苗,并用活体红色荧光成像探讨其在动物体内免疫原性.方法:以pET28a-Ag85B基因组DNA为模板,用PCR扩增获得Ag85B全长基因;将PCR产物构建成pUCm-Ag85B亚克隆;经限制性内切酶消化后克隆入pVAX1载体中构建pVAX1-Ag85B,酶切、DNA测序鉴定.并将构建的DNA疫苗经肌肉免疫可视化膀胱移植瘤模型,通过活体红色荧光成像,从整体上直接、可视地观测Ag85B的免疫原性.结果:经Nhe I和Hind Ⅲ双酶切、DNA测序鉴定后证实,Ag85B基因定向克隆入pVAX1载体,碱基无突变,序列完全正确.免疫小鼠后,pVAX1-Ag85B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性,但效果不及卡介苗.结论:成功地构建了pVAX1-Ag85B质粒,为膀胱肿瘤的基因免疫治疗提供可靠的实验方法.免疫小鼠后,可提高膀胱癌小鼠免疫水平,但效果不及卡介苗.
作者：汪海龙；杨晓峰；张宗平；王安果；唐硕
来源：临床泌尿外科杂志 2011 年 26卷 4期
