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目的 研究缺血后处理对缺氧/复氧损伤后大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 应用NRK-52E建立有效的体外模型,实验分为对照组:应用对照缓冲液培养,3h后换完全培养基培养;缺血再灌注损伤组(IRI组):应用缺血缓冲液培养,3h后同样更换完全培养基培养;缺血后处理组(IPO组):应用缺血缓冲液培养3h,立即行体外缺血后处理,然后更换完全培养基.用流式细胞仪和Hoechst检测细胞凋亡.于3、6、12、24h后收集各组细胞,蛋白印迹法检测Bcl-2,Bax,Caspase-3,cleaved-Caspase-3和Caspase-8等蛋白水平.结果 在经历缺血3h后再灌注至24h后,IRI组和IPO组有明显细胞凋亡,但IPO组凋亡明显较IRI组减轻.IRI组和IPO组Bax,cleaved-Caspase-3,Caspase-8蛋白的表达都明显升高,但是IPO组表达较IRI组显著减轻(P<0.05).结论 3h的体外缺血再灌注损伤可以诱导肾小管上皮细胞的凋亡,而缺血后处理能抑制凋亡,机制可能与通过抑制Caspase通路有关.

作者:陈晖;王磊;翁小东;刘修恒

来源:临床误诊误治 2013 年 26卷 10期

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作者:
陈晖;王磊;翁小东;刘修恒
来源:
临床误诊误治 2013 年 26卷 10期
标签:
缺血 印迹法,蛋白质 细胞凋亡 Ischemic Blotting Protein Apoptosis
目的 研究缺血后处理对缺氧/复氧损伤后大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 应用NRK-52E建立有效的体外模型,实验分为对照组:应用对照缓冲液培养,3h后换完全培养基培养;缺血再灌注损伤组(IRI组):应用缺血缓冲液培养,3h后同样更换完全培养基培养;缺血后处理组(IPO组):应用缺血缓冲液培养3h,立即行体外缺血后处理,然后更换完全培养基.用流式细胞仪和Hoechst检测细胞凋亡.于3、6、12、24h后收集各组细胞,蛋白印迹法检测Bcl-2,Bax,Caspase-3,cleaved-Caspase-3和Caspase-8等蛋白水平.结果 在经历缺血3h后再灌注至24h后,IRI组和IPO组有明显细胞凋亡,但IPO组凋亡明显较IRI组减轻.IRI组和IPO组Bax,cleaved-Caspase-3,Caspase-8蛋白的表达都明显升高,但是IPO组表达较IRI组显著减轻(P<0.05).结论 3h的体外缺血再灌注损伤可以诱导肾小管上皮细胞的凋亡,而缺血后处理能抑制凋亡,机制可能与通过抑制Caspase通路有关.