目的 应用简化的两步法细菌内同源重组高效制备TGF-β1基因重组腺病毒载体,为下一步的基因治疗奠定基础.方法 应用PCR技术扩增TGF-β1-pcDNA 3.1质粒中的目的 基因片段,将TGF-β1目的 基因片段定向克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV中,转化DH 5a感受态细胞,用卡那霉素平板筛选阳性克隆,提取质粒,将酶切鉴定正确的质粒用Pme Ⅰ线性化后采用两步法同源重组:先将pAdEasy-1转化入BJ 5183细菌中,制备pAdEasy-1-BJ5183感受态细胞,再将Pme Ⅰ线性化的pAdTrack-CMV-TGF-β1转入其中,进行同源重组,用卡那霉素平板筛选小的阳性克隆,提取质粒,酶切或PCR鉴定.结果 经酶切,PCR鉴定成功构建了TGF-β1重组腺病毒载体.结论 运用简化的两步法细菌内同源重组可以在大肠杆菌中快速高效地构建重组腺病毒载体.
作者：黄宁；曾令兰；李淑莉
来源：临床消化病杂志 2007 年 19卷 3期
