目的:采用腺病毒介导的去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2(tMfn2)感染血管平滑肌细胞(VSMCs),研究其促VSMCs凋亡的作用及其相关的信号通路.方法:用携带大鼠线粒体融合素基因2(Mfn2)的腺病毒(Adv-Mfn2-GFP)和携带tMfn2基因的腺病毒(Adv-tMfn2-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦显微镜技术观察tMfn2和Mfn2的融合蛋白在细胞中的定位;细胞凋亡ELISA方法、TUNEL染色法研究Mfn2、tMfn2对VSMCs凋亡的影响;Western Blot方法研究tMfn2促进VSMCs凋亡的相关信号通路.结果:激光共聚焦显微镜成像技术证实tMfn2融合蛋白主要游离于细胞质内,而Mfn2融合蛋白主要位于线粒体外膜.采用ELISA方法证实Adv-tMfn2-GFP感染组促进VSMCs凋亡作用比Adv-Mfn2-GFP感染组更显著;Adv-tMfn2-GFP感染组TUNEL染色的凋亡细胞较Adv-Mfn2-GFP感染组明显增多(P<0.05).Western Blot结果显示,与空白对照组相比,Adv-Mfn2-GFP感染组、Adv-tMfn2-GFP感染组对应的P-Akt条带明显减弱,且后者更显著(P<0.05).结论:tMfn2由于去除了穿膜区序列,其表达产物主要游离于细胞质中,更易于通过Ras-PI3K/Akt信号通路,抑制Akt的磷酸化,促进VSMCs凋亡,且作用较Mfn2更明显.
作者：糜涛；赵丽；郭小梅；陈光慧
来源：临床心血管病杂志 2008 年 24卷 9期
