目的:探讨miR?490?3p在阿霉素( ADM)耐药乳腺癌细胞系MCF?7/ADM中的表达情况及其对MCF?7/ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法以野生型人乳腺癌细胞系MCF?7及其耐药型细胞系MCF?7/ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR(qPCR)比较两种细胞中miR?490?3p的表达水平,将miR?490?3p的过表达载体pcDNA3?1(+)?miR?490?3p瞬时转染至MCF?7/ADM细胞(过表达组)后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3?1(-)空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3?1(+)?miR?490?3p对各组MCF?7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF?7/ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度( IC50)及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V/FITC流式细胞术检测各组 MCF?7/ADM 细胞的凋亡率, Western blotting 检测耐药蛋白 P?糖蛋白( P?gp ),乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P?gp活性。结果MCF?7/ADM细胞中miR?490?3p的表达水平为0?24±0?07,显著低于野生型MCF?7细胞的1?02±0?03(P<0?05);过表达组瞬时转染24~96 h的miR?490?3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组( P<0?05)
作者:王晓先;孔凡君;李飞;张硕
来源:临床肿瘤学杂志 2015 年 9期