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[背景]脂质代谢失衡与多种疾病的发生发展密切相关,磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶点(PI3K/AKT/mTOR)信号通路是脂质代谢的重要调控通路,矽肺与脂质代谢异常是否有关尚待探索.[目的]观察二氧化硅(SiO2)染毒后,肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞内脂质沉积情况,胆固醇及PI3K、AKT、mTOR磷酸化蛋白表达的变化,探讨SiO2是否通过该通路调控脂质变化.[方法](1)采用50 mg·L–1 SiO2混悬液染毒MLE-12细胞,分为对照组和12、24、48 h SiO2染毒组.(2)根据PI3K抑制剂LY294002对细胞增殖影响的实验结果,选择5μmol·L–1进行后续实验.将细胞分为对照、50 mg·L–1 SiO2、50 mg·L–1 SiO2+5μmol·L–1 LY294002、5μmol·L–1 LY294002四组,均染毒细胞48 h.采用酶法试剂盒检测各组细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯(总胆固醇与游离胆固醇的差值)、甘油三酯含量,采用油红"O"染色法观察细胞内脂质沉积状况,采用Western blotting检测PI3K、AKT、mTOR磷酸化蛋白的表达水平.[结果](1)50 mg·L–1的SiO2染毒后,与对照组相比,随着染毒时间的延长:细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量呈现增加的趋势,24、48 h组均明显升高,在48 h组,总胆固醇由对照组的(2.242±0.181)mg·g–1升高到(5.148±0.544)mg

作者:郝小惠;邵京;吴慧;靳宜璇;郭灵丽;刘和亮;杨方

来源:环境与职业医学 2022 年 39卷 5期

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作者:
郝小惠;邵京;吴慧;靳宜璇;郭灵丽;刘和亮;杨方
来源:
环境与职业医学 2022 年 39卷 5期
标签:
二氧化硅 胆固醇 矽肺 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶点信号通路 MLE-12细胞
[背景]脂质代谢失衡与多种疾病的发生发展密切相关,磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶点(PI3K/AKT/mTOR)信号通路是脂质代谢的重要调控通路,矽肺与脂质代谢异常是否有关尚待探索.[目的]观察二氧化硅(SiO2)染毒后,肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞内脂质沉积情况,胆固醇及PI3K、AKT、mTOR磷酸化蛋白表达的变化,探讨SiO2是否通过该通路调控脂质变化.[方法](1)采用50 mg·L–1 SiO2混悬液染毒MLE-12细胞,分为对照组和12、24、48 h SiO2染毒组.(2)根据PI3K抑制剂LY294002对细胞增殖影响的实验结果,选择5μmol·L–1进行后续实验.将细胞分为对照、50 mg·L–1 SiO2、50 mg·L–1 SiO2+5μmol·L–1 LY294002、5μmol·L–1 LY294002四组,均染毒细胞48 h.采用酶法试剂盒检测各组细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯(总胆固醇与游离胆固醇的差值)、甘油三酯含量,采用油红"O"染色法观察细胞内脂质沉积状况,采用Western blotting检测PI3K、AKT、mTOR磷酸化蛋白的表达水平.[结果](1)50 mg·L–1的SiO2染毒后,与对照组相比,随着染毒时间的延长:细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量呈现增加的趋势,24、48 h组均明显升高,在48 h组,总胆固醇由对照组的(2.242±0.181)mg·g–1升高到(5.148±0.544)mg