目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10融合蛋白,获得有生物学活性的IL-10.方法限制性内切酶Nco Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切目的基因IL-10,插入到同样双酶切的表达载体pET32a,构建重组载体IL-10/pET32a,测序正确后转化E.coli BL21(DE3),不同温度、低浓度IPTG诱导工程菌表达目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达,ELISA和MC/9细胞增殖法分别测定IL-10的含量及生物学活性.结果构建的表达重组载体IL-10/pET32a经酶切鉴定和序列测定表明完全正确,诱导工程菌可以表达可溶性的融合蛋白IL-10-Trx,同时也存在包含体融合蛋白,经Western blot鉴定存在有目的蛋白IL-10,MC/9细胞增殖法测定可溶性的融合蛋白具有生物学活性.结论成功表达了具有生物学活性的融合蛋白IL-10-Trx,有助于下游纯化和制备hIL-10基因工程药物.
作者：井申荣；邹全明；洪愉；毛旭虎
来源：免疫学杂志 2006 年 22卷 4期
