目的 构建含有TβRⅡDNglytk的慢病毒质粒载体,生产出相应的慢病毒,用于对TGF-β失敏感的CTL的制备.方法 先以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡDN和HSV-tk基因,用重组PCR方法获得TβRⅡDNglytk融合基因,用PCR扩增出TRANSglytk基因;再用TOPO克隆技术将其连接到慢病毒表达质粒,经测序验证;最后用Invitrogen公司提供的ViraPowerTM Lentiviral System和293FT细胞合成慢病毒,并用293细胞完成其滴度测定.结果 完成慢病毒质粒TβRⅡDNglytk的构建,经测序验证序列正确;生产的慢病毒具有感染能力,其滴度达到实验要求,可用于对TGF-β不敏感的肿瘤特异性CTL的制备.结论 运用重组PCR技术合成TβRⅡDNglytk及TRANSglytk两个融合基因,并用TOPO克隆技术连接到pLenti6/V5-D-TOPO(R)载体,成功构建了慢病毒表达载体,说明此方法用于病毒载体的构建是快捷可行的;用ViraPowerTM Lentiviral System和293FT细胞成功制备了慢病毒,为生产TGF-β不敏感的人肿瘤特异性CTL提供了基础.
作者：杨阔；张婷；徐勇；畅继武；刘妍；张志宏
来源：中华内分泌外科杂志 2009 年 3卷 5期
