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目的 构建干扰素β启动刺激因子1(IPS-1)的300~444位氨基酸缺失突变体重组质粒,并初步鉴定.方法 通过重叠延伸PCR法获得缺失300~444位氨基酸的突变体△IPS-1,构建缺失突变体重组质粒pEF-BOS-FLAG-△IPS-1,并经XbaⅠ及claⅠ双酶切及测序鉴定.结果 双酶切缺失突变体重组质粒pEF-BOS-FLAG-△IPS-1后,琼脂糖凝胶电泳可见1 250 bp附近的片段.DNA测序结果做BLAST分析,显示重组质粒含有1 266 bp的目的 基因片段,读码框正确,无碱基错配和移码突变.结论 成功构建了缺失300~444位氨基酸的IPS-1基因重组真核表达载体pEF-BOS-FLAG-△IPS-1.

作者:马安;肖建华

来源:南华大学学报(医学版) 2008 年 36卷 2期

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作者:
马安;肖建华
来源:
南华大学学报(医学版) 2008 年 36卷 2期
标签:
IPS-1 缺失突变体 重叠延伸PCR
目的 构建干扰素β启动刺激因子1(IPS-1)的300~444位氨基酸缺失突变体重组质粒,并初步鉴定.方法 通过重叠延伸PCR法获得缺失300~444位氨基酸的突变体△IPS-1,构建缺失突变体重组质粒pEF-BOS-FLAG-△IPS-1,并经XbaⅠ及claⅠ双酶切及测序鉴定.结果 双酶切缺失突变体重组质粒pEF-BOS-FLAG-△IPS-1后,琼脂糖凝胶电泳可见1 250 bp附近的片段.DNA测序结果做BLAST分析,显示重组质粒含有1 266 bp的目的 基因片段,读码框正确,无碱基错配和移码突变.结论 成功构建了缺失300~444位氨基酸的IPS-1基因重组真核表达载体pEF-BOS-FLAG-△IPS-1.