目的：构建肌酐水解酶的重组质粒转染至大肠杆菌中,研究其蛋白的表达及活性。方法根据Genbank上肌酐水解酶基因序列( D45424.1),进行生物合成,得到肌酐水解酶基因片段C,聚合酶链反应( PCR)扩增后,与质粒GV296连接,构建成重组质粒GV296￣C,转染至大肠杆菌BL21(DE3),构建成基因工程菌GV296￣C/BL21( DE3)。进行十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺( SDS￣PAGE)分析后,测定培养液肌酐浓度变化。结果成功构建重组质粒GV296￣C,电泳显示目的片段约为0.783Kb,测序结果与D45424.1基因序列一致。重组质粒GV296￣C转染至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经SDS￣PAGE分析酶蛋白的分子量约为29KD。结论成功构建工程菌GV296￣C/BL21( DE3),诱导后高效表达肌酐水解酶,具有水解肌酐活性。
作者：杨波；蒋芬；朱艳；杨成；向铁勇；段绍斌；蒋云生
来源：中南医学科学杂志 2016 年 44卷 5期
