目的: 构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物(PIns),进行其性质研究.方法: 采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28a后,再将经过改构后的硫氧还蛋白(1-20aa)的基因片段与重构胰岛素原基因的5′端通过赖氨酸连接,成功构建了速效人胰岛素原类似物融合蛋白(FKPPIns)的表达载体(pET28a-FKPPIns).此融合蛋白在大肠杆菌BL-21(DE3)中以包涵体的形式表达,经包涵体洗涤和DEAE阴离子交换树脂纯化后进行复性、酶切.酶切产物经RP-HPLC纯化后,质谱法测定其分子量;等电聚焦法测定此蛋白的等电点;凝胶过滤法测定其自身的缔合性质.对新西兰大白兔肌肉注射纯化后PIns,进行初步的药效学评价.结果: 获得了结构为R-P-K-P-Insulin的PIns纯品,其等电点为7.3,自身缔合性较标准胰岛素显著下降.结论: PIns与标准人胰岛素相比,起效快、达峰时间及持续时间短.
作者：刘素丽；鲁勇；王学军；曹荣月；刘景晶；范豪；李泰明
来源：东南大学学报（医学版） 2009 年 28卷 5期
