目的 构建表达O型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Vims,FMDV)VP1基因的重组腺病毒并对其进行鉴定.方法 将FMDV VP1基因克隆到腺病毒的穿梭载体pAdeno Vatotr-CMV5-IRES-GFP中.得到的阳性穿梭质粒经Pme Ⅰ酶线性化后.利用电转化技术将线性化的阳性质粒与腺病毒骨架载体pAdeno Vator△E1/E3共转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,使其在大肠杆菌中进行同源重组.将筛选到的重组病毒质粒经Pac-Ⅰ酶线性化后暴露出包装信号,通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293A细胞后得到重组病毒.利用报告基因GFP和细胞病变检测重组病毒滴度和感染效率,通过PCR和westem-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中的表达.结果 成功构建了表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5-VP1,其滴度为1011.87个TCID50/mL.western-blot检测重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应.结论 重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应,PCR和westem-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中稳定表达.
作者：苏春霞；段相国；张艳丽；摆茹；陈溥言
来源：宁夏医科大学学报 2009 年 31卷 5期
