目的 构建稳定表达肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因重组腺相关病毒过表达质粒载体,制备并纯化HGF过表达的高滴度重组腺相关病毒.方法 合成HGF基因并利用PCR扩增,退火形成双链,与pAAV-ITR-CMV质粒经XhoI单酶切连接构建质粒pAAV-ITR-CMV-AAV9-HGF,转化至大肠杆菌DH5α,提质粒后经酶切和测序鉴定证实重组质粒克隆正确,将重组质粒转染至293FT细胞中包装为腺相关病毒.小鼠注射病毒后通过Western blot法评价HGF的蛋白表达水平.结果 扩增产物包含HGF CDS全序列的2186 bp,酶切结果与测序结果说明PCR扩增HGF目的片段成功;实时荧光定量PCR检测结果显示,纯化后所得的过表达HGF的腺相关病毒滴度为5.22×1012 vg·mL-1;HGF过表达组HGF蛋白相对表达含量较生理盐水组与阴性对照组均升高(P均<0.01).结论 本研究成功构建了HGF腺相关病毒载体且病毒滴度达到普通动物注射要求,证明腺相关病毒载体构建成功.
作者：王秋实；孙岳；刘太阳；宝瑞；郝玮；刘耀阳；李媛媛；畅思容；王梦；刘志宏
来源：宁夏医科大学学报 2022 年 44卷 4期
