目的 肿瘤抑制基因异常甲基化状态与白血病发生关系密切,发展白血病甲基化标志物成为研究热点.但白血病类型复杂,利用单个基因甲基化模式作为肿瘤标志物具有一定局限性.本研究通过探讨基于肿瘤抑制基因p73和死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase gene,DAPK)异常甲基化模式对白血病诊断分型的价值和意义,寻找一种联合多基因异常甲基化模式作为白血病肿瘤标志物的方法.方法 应用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP),分析正常人白细胞、单核细胞系白血病细胞株U937、粒细胞系HL-60及淋巴细胞系Jurkat基因组中,p73和DAPK基因启动子区CpG岛甲基化状态,将测序结果汇集到Office Excel 2010文件中,并计算各CpG位点甲基化率,绘制2个基因在4种细胞来源基因组中的CpG岛甲基化模式图,从而筛选特异甲基化位点组合.通过甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP),在白血病细胞株、30例正常对照和104例白血病惠者外周血标本中,验证基因异常甲基化模式的诊断效能.结果 成功测序约107个含BSP产物转化质粒的菌株,并绘制出p73和DAPK基因CpG岛甲基化模式图.正常细胞基因组两者去甲基化程度远高于白血病细胞株.p73基因在正常细胞与白血病细胞株中,甲基化状态完全相反.DAPK基因在HL-60中与其他
作者:叶松山;刘先娟;侯俊然;毛秉豫;邱耕
来源:中华肿瘤防治杂志 2016 年 23卷 11期