目的:构建二氢叶酸还原酶(dyhidrofolate reductase,DHFR)基因RNA干扰质粒载体,为探讨抑制DHFR基因表达在卵巢癌铂类耐药治疗中的意义奠定基础.方法:设计DHFR基因靶向的发夹状siRNA,筛选出最佳siRNA沉默片段,退火后连接入pGPU6/GFP/Neo载体,转化后进行序列鉴定,脂质体转染SKOV3细胞株,并进行荧光摄像.结果:将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGPU6/GFP/Neo载体,测序结果正确.转染SKOV3细胞后,PCR鉴定干扰效果,G418筛选稳定细胞株.结论:成功构建针对DHFR基因的siRNA载体,找到了有效的干扰靶序列,转染SKOV3细胞后,DHFR基因的表达明显减弱.
作者：李状；王琪；张玮；阳志军；唐步坚；李力
来源：肿瘤预防与治疗 2012 年 25卷 4期
