以重组腺相关病毒载体（recombinant adeno -associated virus，rAAV）携带增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因转染入大鼠骶髓，观察其定位及表达情况，评价其作为骶髓病变基因治疗载体的可行性。SD 大鼠经膀胱肌层多点注射 rAAV2/1-EGFP，分别按转染复数1×109、1×1010、4×1010转染。分别在2周、4周、8周后，将大鼠深麻醉，经左心室-升主动脉插管4％多聚甲醛灌注固定，慢慢剥离出脊髓，将脊髓放入含30％蔗糖的 PBS 中过夜（4℃），然后恒温冰冻切片机内连续切片，厚度12μm，免疫荧光染色（GFP 抗体，FITC 标记山羊抗兔 IgG）后，在荧光显微镜下观察 EGFP 表达情况。荧光显微镜下显示，4周时，转染复数为4×1010的大鼠骶髓神经元表达强荧光，可见增强型绿色荧光蛋白弥散表达。rAAV2/1载体可将 EGFP 基因有效地转染入大鼠骶髓，rAAV2/1载体是一种理想的基因治疗载体，为rAAV2/1作为载体转染骶髓治疗神经源性疾病提供理论依据。
作者：胡映秋；徐美玲
来源：生物医学工程研究 2013 年 4期
