目的 探讨血管紧张素转化酶2 (angiotensin converting enzyme 2,ACE 2)对肝细胞凋亡的影响及可能机制.方法 ①利用ACE2过表达DNA载体转染人肝细胞株HepG2细胞;②MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide]法检测过表达ACE2基因的HepG2细胞在棕榈酸(palmitate,PA)处理下的细胞活力;③原位DNA末端酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)检测同周龄雄性C57BL/6和ACE2基因敲除(ACE2-/y)小鼠肝细胞凋亡情况;④实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)法检测凋亡相关基因的表达;⑤蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(anti-apoptotic protein B cell lymphoma-2,Bcl-2)、促凋亡基因(Bc1-2associated X protein,Bax)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、C-Jun氨基末端激酶(C-Jun NH2-terminal kinase,JNK)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase3)蛋白水平的表达情况.结果 ①以不同浓度PA处理HepG2细胞24h后表现为细胞活力的降低,而过表达ACE2基因组细胞活力明显高于绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)组(PA浓度为0.4
作者:宋丽妮;曹曦;刘薇;杨金奎
来源:首都医科大学学报 2018 年 39卷 2期