目的:设计合成优化密码沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,克隆构建优化密码MOMP(HuMOMP)基因的真核表达质粒及EGFP-HuMOMP融合基因表达质粒.方法:利用软件分析比较鼠肺炎沙眼衣原体(MoPn)与人类等哺乳动物基因组密码子使用的差异,根据所得数据对MOMP基因进行优化设计与合成.双酶切pUC-HuMOMP质粒,游离HuMOMP片段,定向克隆入pcDNA3的相应位点,构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP;双酶切游离pcDNA3-HuMOMP中的HuMOMP片段,定向克隆入pEGFP-C1的相应位点,构建重组真核表达质粒pEGFP-HuMOMP;pEGFP-HuMOMP质粒体外脂质体转染COS-1细胞,24 h后观察荧光蛋白的表达.结果:合成的HuMOMP基因全长1125 bp,经DNA测序无误.酶切鉴定pcDNA3-HuMOMP及pEGFP-HuMOMP质粒获得预期分子量DNA片段.EGFP-HuMOMP融合基因在COS-1细胞中获得明显表达,表达产物定位于胞浆.结论:设计合成的优化密码HuMOMP基因能够在哺乳动物细胞中成功表达.
作者：郑燕；赵蔚明；王红；周亚滨；栾怡；齐眉；程轶喆；贾继辉；于修平
来源：山东大学学报（医学版） 2005 年 43卷 1期
