目的:观察siRNA表达质粒稳定转染靶向沉默HER2/neu基因对SK-OV-3卵巢癌细胞株的影响.方法:针对HER2/neu基因序列构建短发夹状siRNA真核表达载体(pGenesil-1-HER2/neu),转染卵巢癌细胞株SK-OV-3,G418筛选出稳定转染株后,采用RT-PCR和Western Blot法观察HER2/neu基因的沉默效果;CCK-8比色分析检测细胞体外增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期.结果:测序证实成功构建HER2/neu的2个短发夹状siRNA真核表达质粒;稳定转染SK-OV-3细胞后,转染了特异性HER-2/neu siRNA的细胞HER-2/neu mRNA及p185蛋白水平均明显低于亲本细胞及转染无义对照序列的细胞;CCK-8比色分析显示HER-2/neu基因沉默的细胞存活分数明显低于HER-2/neu基因高表达的细胞(P=0.000);流式细胞仪细胞周期分析也显示,HER-2/neu基因沉默的细胞处于凋亡状态及非增殖期的比例明显增加(P均＜0.01),而处于合成期的比例却显著减少(P≤0.001).结论:靶向HER2/neu基因的短发夹状siRNA可从转录及翻译水平有效地沉默HER-2/neu基因;HER-2/neu基因沉默的SK-OV-3卵巢癌细胞增殖明显受抑制.
作者：衣翠华；侯明；李丽珍；张昕；魏军民；黎莉；郝静
来源：山东大学学报（医学版） 2006 年 44卷 10期
