目的:观察顺铂(cDDP)对小分子干扰RNA(siRNA)抑制切除修复交叉互补基因1(ERCC1)基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响,并探讨 cDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性。方法根据ERCC1基因序列,设计合成3对特异性的siRNA(分别命名为S1、S2、S3),同时合成阴性对照 siRNA(命名NC)。取对数生长期的A549细胞,采用Lipofectamine2000脂质体转染法进行S1、S2、S3、S1+S2+S3及NC转染,real-time RT-PCR和Western blotting技术检测ERCC1 mRNA和蛋白。结果与NC相比, S1、S2、S3及S1+S2+S3均能下调ERCC1表达,但S1+S2+S3下降最为显著。用NC及S1+S2+S3转染A549细胞,24 h后加入0、0.5、1、2、4、8μg/mL的cDDP,采用 MTS法计算细胞生存率及cDDP对细胞的半数抑制浓度( IC50)。 A549细胞转染后48 h加4μg/mL的cDDP,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果加入0、0.5、1、2、4、8μgm/L 的cDDP,NC转染的 A549细胞存活率分别为100.00%±3.21%、94.86%±7.14%、89.79%±3.29%、66.67%±5.40%、33.31%±1.79%、19.12%±0.41%,S1+S2+S3转染的A549细胞存活率分别为100.0%±6.53%、71.63%±8.23%、59.33%±0.94%、37.42%±1.57%、19.41%±1.41%
作者:宋莹;仇秦威;贺智敏;谷依学
来源:山东医药 2014 年 19期