目的：构建过表达及沉默细胞黏附分子1（CADM1）基因的膀胱癌细胞株。方法培养并收集膀胱癌细胞株T24。①过表达CADM1基因T24细胞构建：将T24细胞分为1、2、3组，real-timePCR扩增CADM1基因全长，与慢病毒载体pHBLV-IRES-ZsGreen-PGK-puro进行连接（1组），并设载体对照组（2组）和空白对照（3组）；经酶切及测序鉴定正确后在293 T细胞中包装病毒，病毒浓缩后感染T24细胞。②沉默CADM1基因T24细胞构建：将T24细胞分为A、B、C、D、E组，设计3条针对CADM1基因的干扰序列（ siRNA1／2／3）分别与载体pHBLV-U6-shRNA-Zs-Green-Puro进行连接（ A、B、C组），D组与pHBLV-U6-ZsGreen-Puro进行连接，E组为空白对照；经双酶切、PCR及测序鉴定连接载体，在293T细胞中包装病毒，病毒浓缩后感染T24细胞。采用real-time PCR检测T24细胞中的CADM1 mRNA，Western blotting法检测CADM1蛋白。结果过表达和沉默CADM1基因的慢病毒载体及细胞株均正确构建。1、2、3组CADM1 mRNA相对表达量分别为4．84±0．02、1．12±0．03、1．00±0．00，CADM1蛋白相对表达量分别为4．53±0．03、1．05±0．04、1．00±0．01，1组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量高于2、3组（ P均＜0．05）。 A、B、C、D、E组CADM1 mRNA相对表达量分别为0．28±0

作者：刘莉；杨永姣；陈业刚；王尚任；刘晓强；陈少峰；孙光

来源：山东医药 2016 年 7期