目的 构建稳定表达Caveolin-3(CAV3)基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株.方法 将野生型CAV3(CAV3-WT)、CAV3-P104L、CAV3-P47L装在带有GFP标签的质粒中,构建目的基因与GFP基因融合的表达质粒,以只含GFP的载体为对照.将C2C12细胞随机分为A、B、C、D组,分别转染对照空载体(NC)、CAV3-WT、CAV3-P47L及CAV3-P104L.以遗传霉素(G418)进行阳性克隆筛选,荧光显微镜下挑选稳定转染的细胞系,Western blotting法检测各组细胞中的CAV3-GFP融合蛋白,免疫荧光法检测各组细胞中的CAV3蛋白,以荧光强度代表目的蛋白相对表达量.结果 经酶切和测序验证,证实4种表达质粒构建成功.B、C、D组细胞中测得CAV3-GFP融合蛋白,A组未测得融合蛋白.A、B、C、D组CAV3蛋白相对表达量分别为23.0 ±2.25、32.3 ±0.35、25.6±0.92、24.3±1.42,B组CAV3蛋白表达增强,与A组相比,P＜0.01;A、C、D组CAV3蛋白表达下调,与B组相比,P均＜0.01.结论 成功构建了稳定表达CAV3-P47L和CAV3-P104L的C2C12细胞,两种细胞中CAV3蛋白表达下调.
作者：邓玉风；黄亿元；尚丽娜；杨立会；黄勤
来源：山东医药 2016 年 56卷 31期
