目的 观察miR-145对大鼠脑动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 利用组织贴块法分离大鼠脑基底动脉VSMC,将细胞分为3组,对照组转染空载体;miR-145组转染miR-145;miR-145+MMP-9组转染miR-145后再转染MMP-9.采用qPCR方法检测各组MMP-9 mRNA表达,Western blotting法检测MMP-9蛋白表达.向三组细胞中加入50 ng/mL TNF-α刺激细胞增殖,采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移能力.根据TargetScan和miRanda数据库预测,野生型MMP-9的3′-UTR区域含有miR-145靶向结合片段,采用双荧光素酶报告基因检测验证miR-145和MMP-9的靶向关系.结果 miR-145组MMP-9 mRNA和蛋白表达均低于对照组(P均<0.05),miR-145+MMP-9组MMP-9 mRNA和蛋白表达均高于miR-145组(P均<0.01).加入TNF-α处理后,miR-145组的细胞增殖OD值低于对照组,miR-145+MMP-9组的细胞增殖OD值高于miR-145组(P均<0.01);miR-145组细胞迁移数低于对照组,miR-145+MMP-9组细胞迁移数高于miR-145组(P均<0.01).双荧光素酶报告检测结果显示,miR-145能够抑制野生型MMP-9的荧光素酶活性(P<0.01),但不能抑制突变型MMP-9的荧光素酶活性.结论 miR-145能够通过下调MMP-9抑制TNF-α诱导的大鼠脑动脉VSMC增殖和迁移.

作者：李文婷；邹伟；曹琳；张平

来源：山东医药 2017 年 57卷 26期